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Investigadores de la Universidad de Valladolid han patentado un método de tinción que realiza, de forma sencilla y económica, el estudio morfológico del núcleo y del citoplasma de cualquier tipo de célula en cultivo y sobre cualquier soporte. Gracias a este procedimiento es posible la observación con microscopia de epifluorescencia del cultivo celular sobre soportes transparentes y también opacos, lo que no era posible hasta el momento.
La microscopía de fluorescencia es uno de los procedimientos más comunes para el estudio de los orgánulos y moléculas que constituyen y caracterizan las células. Así explica Manuel José Gayoso, coordinador del trabajo e investigador de la Universidad de Valladolid.
El importante desarrollo de la terapia celular (consistente en la introducción de nuevas células en un tejido para poder tratar una enfermedad) y de la ingeniería tisular (el uso conjunto de células, biomateriales y factores bioquímicos para reparar tejidos dañados) conlleva el cultivo de diversos tipos celulares, como las células madre, en distintos estadios de diferenciación y especialización.
A su vez, las diferentes aplicaciones terapéuticas de las células en cultivo han hecho necesaria la utilización de una gran variedad de soportes sobre los que cultivar estas células. Algunos de ellos como las láminas de fibrina, los polímeros biocompatibles, los materiales cerámicos e incluso metales como el titanio, son opacos, lo que dificulta el estudio de las células cultivadas sobre ellos.
Como señala Gayoso, "cuando los soportes sobre los que se cultivan las células son transparentes el estudio se puede llevar a cabo con luz transmitida y microscopía de contraste de fase, contraste interferencial o con microscopia de campo claro. En este último caso, las células se tiñen previamente con métodos generales como el de Giemsa.
No obstante, cuando los soportes son opacos, es necesario utilizar epi-iluminación, como generalmente se hace en microscopia de fluorescencia, donde no se dispone de un método sencillo de coloración general que permita el estudio de la morfología del núcleo y del citoplasma celular".
Método útil
El procedimiento consiste en utilizar una mezcla de colorantes fluorescentes para el núcleo celular y otro para el citoplasma. El equipo ha patentado el nuevo método para teñir las células que posibilita su estudio en soporte opaco.
En concreto, consiste en utilizar dos colorantes, eosina y DAPI (diclorhidrato de 4',6-diamidino-2-fenilindol), un colorante del grupo indol. “Con ellos se consigue una tinción rápida, fácil, barata y bastante eficaz", subraya Manuel José Gayoso. "Creemos que no hay nada comparable para el estudio general de la morfología de las células en cultivo”.
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